神經纖維瘤病友希望工程~台大醫院發表論文摘要

由於台灣公益服務協會(智邦公益館)在2003年歲末募款--關懷系列之專案募款項目--『神經纖維瘤病友希望工程』之執行，以捐助台大醫院基因醫學中心進行業NF1基因相關研究，其研究之成果並於國際醫學雜誌：『人類突變(HUMAN MUTATION)』發表專刊。該期刊為人類基因突變相關領域的國際知名期刊，為該領域裡共131份期刊裡排名18名，具有相當高的影響力係數為6.473，主要的文章以人類基因的突變，多型性變異，分子生物診斷，醫學臨床應用等方面；是基因醫學領域裡相當重要的期刊。本次發表之內容，為醫學史上第一次華人大型的NF1基因突變點研究，成效卓著。特翻譯部份報告內容如后，提供對台灣NF1病例關心人士參考。
刊物: Human Mutation (人類突變)
網站：
http://www3.interscience.wiley.com/cgi-bin/jhome/38515?CRETRY=1&SRETRY=0

Identification of Forty-Five Novel and Twenty-Three Know NF1 Mutations in Chinese Patients With Neurofibromatosis Type 1
共同發表人：台大醫院李明仁醫師、蘇怡寧醫師等十多位醫師?
標題：台灣NF1病例研究(2006)
副標：NF1華人病例研究確認45例突變點研究
23例已知NF1基因突變病例研究報告

目前在華人方面有關於NF1基因突變的研究尚且有限，此項研究是第一次華人大型的NF1基因突變點研究。參與的107位NF1台灣/中國病友中，其中58位為偶發性，另外49位則是有家族病史；年齡層自6個月至57歲，其中77%是年滿18歲以上並有2項以上的病理特徵，如咖啡牛奶斑、神經纖維腫瘤、叢形神經纖維瘤、腋下或鼠蹊部位色素斑、眼睛出現虹膜色素缺陷瘤、神經稍腫瘤或家族病史。檢測分析方法和技術分別有：PCR amplification、高解析液相色層分析(DHPLC)、序列分析法、RT-PCR、微衛星基因型、Q-PCR analysis。
神經纖維瘤病(NF1)是由於基因突變而產生，其特徵包括皮膚的神經纖維瘤以及達到一定數量的咖啡牛奶斑。由於基因突變點常分散在整個遺傳基因之中，因此要確認疾病之致病基因是個極為重大的挑戰。在這份研究中，我們對107位台灣NF1病友抽樣出68位進行致病基因之探究，研究中使用了現有相關基因檢測技術：58位在第一階段使用異質雙鏈分析技術，接著則是採用序列分析方法進行分析；另外5位則是僅使用直接序列分析；最後的5位透過LOH和P-QCR顯示其NF1基因有著大量的缺失。在經過臨床研究分析之後，首次發現68位中有45位患者的NF1型基因突變--錯意缺失*(mis-sense)、無意義缺失*(non-sense)、框架轉移的缺失 (frame-shift)或接合部位缺失 (splice-site)—散發於整個基因之中。本研究的檢測率及檢測出的基因突變類型和已發表的臨床研究資料一致。

神經纖維瘤病是世界上最普遍、與人類神經系統有關的常染色體顯性遺傳疾病之一，其發生率是三千名新生兒中即有一名NF1患者。其病理特徵包含：咖啡牛奶斑、表皮或皮下之腫瘤、皮膚上較大的腫塊(叢形神經纖維瘤)、眼睛出現虹膜色素缺陷瘤、皮膚產生色素斑。其他極少數病患會產生的特徵有脊椎側彎、大頭症、假性關節、身高不高、智力障礙以及惡性腫瘤。除了咖啡牛奶斑可在非常年輕的時候發現，其餘的臨床症狀通常發生於青春期。
NF1基因是由60個外顯子(exon)組成排序成一8.9KbmRNA，其長約350Kb的genomic sequence位於染色體17q11.2的位置，其基因產物為neurofibromin，含有250KDa的親水性蛋白質擁有2818個氨基酸。NF1基因突變率約為~1x10-4/配偶/遺傳致使NF1成為發病率最高的人類遺傳疾病。會產生突變的地方包含單一核甘酸取代和龐大的基因缺失，大約有一半的突變會重生但不好叢聚於NF1基因中。從臨床觀察中顯示，目前並無單一方法可完成全部的檢驗過程。 從超過九成的NF1基因突變研究中可知，NF1基因突變可以是單一取代、少數核甘酸的缺失或插入，而這可用異質雙鏈分析法中的DHPLC檢測出來。然而，DHPLC和直接定序法皆無法檢測出總的基因缺失或插入，因此以微衛星位點來檢驗NF1基因的LOH檢測到大幅的基因缺失。
研究結果
此次研究結果大致上和其他相關研究報告相一致，唯有幾處相異。在這107的案例中，所有的exon皆經過異質雙鏈分析法，另外，為偵測大量基因缺失，有44位病人是採用LOH來觀察，其中有五名被檢測出是極為罕見的基因突變情形 (homozygous)。並且，透過序列分析的觀察，發現新的突變情形最主要是透過影響改變一些在不同物種間被高度保留之氨基酸所導致這其中之機轉最主要是改變了電荷或是疏水性所導致(novel mutation affecting highly conserved amino acids causing changes in charge and/or hydrophobicity)。另外，首度發現20個non-sense中有10位的突變與精胺酸之改變 condon for Arginine (CGA→TGA)相關。
此次參與者的病理特徵比例，咖啡牛奶斑是最普遍的徵狀，皮膚神經纖維瘤則次之，超過25%的患者有脊椎側彎和骨頭病變，惡性腫瘤的例子僅2例(占2.9%)-其本身即有叢發性神經纖維瘤，在此份研究中，未顯示出遺傳基因型和顯性之間的相關性。
目前在華人方面有關於NF1基因突變的研究尚且有限，此項研究是第一次華人大型的NF1基因研究。透過一連串的技術分析可確認此次研究對象的NF1基因分子缺失情形，多數的人最初是透過DHPLC再經由序列分析來進行，其結果和其他相關研究結果並無明顯差異，另5名僅採用序列分析以及其餘5位採用LOH和Q-PCR分析法。此次研究的NF1基因大量缺失頻率(週期)和其他已發表之數據相一致。